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如何用组织研磨仪提取RNA

作者:组织研磨仪 时间:2020-06-20 11:30:02浏览1042 次

信息摘要:

大、小鼠皮肤组织提取DNA、RNA是目前各高校实验室的一项难题。本次实验对象为小鼠去毛后处理过的皮肤,要求磨细一点,提高RNA的浓度,涉及到RNA提取还需要低温研磨,因为有提取液,所以温度不能太低,否则冻住液体无法研磨。

组织研磨仪破碎肌肉组织提取RNA

通过大量样品破碎测试发现,动物组织样品相比其他样品更难破碎,特别是一些内脏组织、结缔组织、心脏肌肉组织、肺部组织,一般很难用手工或者常规组织匀浆仪彻底破碎。因为这些动物组织样品一般韧性较大,如果使用手工研磨或者组织匀浆仪,不仅一次处理量太少、易污染且难清洗,处理后的样品还不够均匀细致,达不到后续提取RNA等实验的要求。组织研磨仪研磨内脏及肿瘤细胞,后续提取RNA,实验顺利,效果很好,以下是研磨实验的主要流程,可供相关实验人员参考:

研磨材料准备:
·样品种类:人体肿瘤细胞、胰腺、前列腺、脂肪、肌肉,每个组织各研磨2个样品,用液氮处理保存。
·研磨配件种类:组织研磨仪2.0ml研磨管适配器(28×2.0ml)1对,6mm不锈钢研磨珠若干颗。

研磨实验流程:
1. 高温灭菌预处理6mm不锈钢研磨珠;
2. 将灭菌处理过的研磨珠与研磨管适配器置入液氮中同时进行预冷处理;
3. 将样品从液氮中取出,在研钵中切割成约4-5mm宽的样品小块。
4. 在2ml无菌圆底离心管(进口)中依次加入:预冷6mm研磨钢珠1颗、切好的样品块1块、预冷6mm研磨钢珠1颗。
5. 确保离心管中有2颗6mm研磨钢珠和1块样品块后,快速盖好管盖,对称放入预冷的2.0ml研磨管适配器孔槽中。
6. 将适配器固定在TL2020组织研磨破碎仪的两个摇臂上,设置转速1800rpm,时间120S(胰腺样品180S),一键开始研磨。
8. 研磨时间结束,卸载适配器取出离心管,在管中快速加入裂解液,然后按照后续RNA提取实验步骤操作。

研磨效果:
·后续成功提取RNA,且电泳图条带清晰可见。

本实验中,使用组织研磨仪一次性高速破碎56个2ml的内脏样品组织,不仅操作灵活方便,还能安全轻松地进行液氮冷冻研磨操作,保证了RNA提取等温度敏感性后续实验的顺利进行。此外,用组织研磨仪进行类似的动物样品组织研磨,避免了样品间的交叉污染,省去了清洗仪器的繁琐工作,对于样品量巨大且需要无菌操作的实验,无疑大大提高了效率。

组织研磨仪提取RNA

组织研磨仪研磨动物组织提取RNA

在制作动物皮肤组织样品的时候,会发现皮肤组织韧性特别高。皮肤富含纤维组织和弹性,要从这类组织有效提取RNA是非常困难的,因此完全研磨这些组织是十分具有挑战性的。传统的人工或用手持式匀浆器来研磨不仅费时,研磨后的效果也不尽人意比较差,RNA产量低且令样本发热,那么使用组织研磨仪会有什么不同的效果呢?

大、小鼠皮肤组织提取DNA、RNA是目前各高校实验室的一项难题。本次实验对象为小鼠去毛后处理过的皮肤,要求磨细一点,提高RNA的浓度,涉及到RNA提取还需要低温研磨,因为有提取液,所以温度不能太低,否则冻住液体无法研磨,

实验步骤:
1、准备金属适配器一套,离心管和研磨珠若干。
2、预冷模块,把金属适配器放到液氮或冰箱中预冷(不用的时候顺手把模块放入-20冰箱,即可省去预冷步骤)
3、取适量小鼠皮肤组织、研磨珠、提取液一起放入离心管中,每管加三到五颗研磨珠,盖子盖上。
4、将完成预冷后的金属模块取出,放入研磨仪中固定(适配器底部与轴的卡槽互相卡牢)放平后将离心管分别放入适配器对应孔位,(注意平面配平,对称放样)盖上适配器盖,旋紧螺帽。
5、设置好参数(根据组织类型以及量微调),开始研磨。
6、磨好后打开仪器取出离心管,即可进行后续实验。

注意事项:

1、按照组织的种类和量来选择研磨珠能达到zui好的效果,有不清楚的及时问上海净信销售人员。
2、往金属适配器里放离心管时注意平面配平,保证适配器压盖在水平线上。

实验选用仪器: 全自动样品快速研磨仪
与目前已有的其它样品制备方法相比,具有通用性广、高效灵活的优点。该系统避免了研磨、匀浆、超声波处理等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点,可以高效、快速、稳定地裂解并纯化各种类型样品的核酸与蛋白。

组织研磨仪提取RNA

组织研磨仪快速提取鸡肉组织中的RNA实验步骤

一、实验目的:快速提取动物组织中的总RNA
二、实验器材及试剂:研磨仪,离心管,移液枪,电泳槽、凝胶成像等;无水乙醇,液氮,琼脂糖。
三、实验材料:鸡肉组织。
四、实验步骤
1)鸡肉组织
2)鲜组织用解剖刀迅速切成小碎离心管中,加入小号研磨珠,将管子盖严后放入液氮中冷冻,设置参数,点击运行即可开始研磨。
3)取适量组织细粉转入装有组织裂解液RLT的离心管中,用手剧烈振荡若干秒,充分裂解。用带钝针头的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
4)将匀浆后裂解物离心,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物,将裂解物上清小心转到一个新离心管。
5)接操作步骤项下3。
6)较估计裂解物(上清)体积,加入等体积的乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
7)立刻将混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)离心60秒,弃掉废液。
8)加去蛋白液RW1,室温放置几秒,离心30秒,弃掉废液。
9)如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置几分钟再离心。
10)加入漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),离心30秒,弃掉废液。加入漂洗液RW,重复一遍。
11)将吸附柱RA放回空收集管中离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12)取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期全自动样品快速研磨仪RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water,室温放置1分钟,离心1分钟。
13)如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤8,合并两次洗脱液,或者使用次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
14)洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
五、实验结果:
提取的鸡肉组织RNA点样量为1ul,鸡肉组织RNA两个条带亮度相当,提示出现降解。

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