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GFP和EGFP之间的区别

作者:上海峰志 时间:2021-04-12 09:52:14浏览15920 次

信息摘要:

绿色荧光蛋白GFP和EGFP之间的主要区别在于GFP(代表绿色荧光蛋白)是一种在暴露于蓝光时表现出明亮的绿色荧光的蛋白质,而EGFP(代表增强型绿色荧光蛋白)表现出比GFP更强的荧光。 此外,GFP和EGFP之间的另一个重要区别是GFP是从水母Aequorea victoria分离出来的野生型蛋白质。但是,EGFP是原始野生型的工程变体。

GFP和EGFP之间的区别

绿色荧光蛋白GFP和EGFP之间的主要区别在于GFP(代表绿色荧光蛋白)是一种在暴露于蓝光时表现出明亮的绿色荧光的蛋白质,而EGFP(代表增强型绿色荧光蛋白)表现出比GFP更强的荧光。 此外,GFP和EGFP之间的另一个重要区别是GFP是从水母Aequorea victoria分离出来的野生型蛋白质。但是,EGFP是原始野生型的工程变体。GFP和EGFP是两种类型的蛋白质,用作内部发色团。它们不需要任何辅助酶/底物,辅因子或基因产物来展示其颜色。因此,两者都被用作分子生物学中基因表达的报告者。

什么是 GFP?

GFP(绿色荧光蛋白)是一种在蓝光或紫外线下发出绿色光的蛋白质。它自然发生在水母,维多利亚水母中。GFP由238个氨基酸组成。GFP的尺寸为26.9 kDa。GFP是分子生物学中的强大工具,因为它具有固有的荧光,没有任何辅助分子。荧光是因为蛋白质的连续氨基酸的共价重排。蛋白质折叠后,主链原子Ser65,Tyr66和Gly67在O的存在下形成高度共轭的平面对羟基苄基亚胺唑啉酮发色团2.晶体结构研究表明,发色团在分子β桶结构核心内的堆积可以保护其免受顺磁性氧,水偶极子或顺式异构化的淬火。此外,发色团与邻近分子的非共价相互作用增强了其光谱性质。

GFP和荧光团的带状表示

图1:GFP和荧光团的带状表示

GFP可以在转基因修饰期间引入生物体中。它也可以世代相传。野生型GFP的主要缺点是由于在37°C等生理温度下低效折叠,导致蛋白质在细胞成像中的有效性降低,从而降低了荧光信号。此外,宿主细胞内GFP的成熟速率缓慢,同时趋于聚集。由于存在两种不同形式的发色团,可以观察到两个激发峰。然而,蛋白质工程通过引入野生型GFP的变体形式解决了大多数问题。

什么是EGFP

EGFP(增强型绿色荧光蛋白)是野生型GFP的变体,相对于GFP具有更高的发射强度。它是较早也是重要的GFP变体之一。F64L和S65T这两个突变在37°C下产生具有更大折叠效率的EGFP。 有趣的是,EGFP在~490nm处具有单个激发峰,因为S65T抑制了395 nm峰,因为它调制了附近Glu222的电离状态。另一方面,F64L提高了37°C时的折叠效率。 重要的是,EGFP的密码子序列针对哺乳动物细胞中的表达进行了优化。

EGFP 表达

图 2:EGFP 表达(烟草叶片的GFP在LUYOR-3415RG照射下发出绿色荧光)

GFP和EGFP之间的相似之处

GFP和EGFP是当暴露于蓝光时表现出亮绿色荧光的蛋白质。

两者都可以作为内部发色团,无需辅助酶/底物,辅因子或基因产物来展示其颜色。

它们与发色团形成经典的β桶褶皱,包含穿过结构核心的螺旋。

它们被用作分子生物学中表达的报告者。

GFP和EGFP之间的区别

GFP:一种野生型蛋白质,在蓝光或紫外线下呈现绿色荧光,自然存在于水母中,维多利亚水母

EGFP:野生型GFP的变体,相对于GFP具有更高的强度发射

GFP:绿色荧光蛋白

EGFP:增强型绿色荧光蛋白

GFP: 野生型

EGFP:突变体

激励峰的区别:

GFP:两个峰值(395 nm 和 490 nm,推荐使用LUYOR-3280UV或3280RB观察GFP表达

为GFP的激发和发射光谱图

上图为GFP的激发和发射光谱图

EGFP:单峰 (490 nm,推荐使用LUYOR-3280RB观察EGFP表达

EGFP的激发和发射光谱图

上图为EGFP的激发和发射光谱图

结论

GFP是野生型蛋白质,当暴露于蓝光或紫外光时,会表现出明亮的绿色荧光。EGFP是GFP的一种变体,与GFP相比,它表现出更高强度的荧光。因此,GFP和EGFP之间的主要区别在于每种蛋白质发出的绿色荧光的强度。

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