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荧光蛋白激发光源应用案例

作者:上海峰志仪器 时间:2021-04-27 09:53:16浏览299 次

信息摘要:

GFP激发光源激发出绿色荧光时,用黄色滤光镜观测,可检测含绿色荧光蛋白(GFP)的生物;激发光源激发红色荧光时,用红色滤光镜观测,可检测含红色荧光蛋白(DsRed)的生物。更多荧光蛋白激发光源用于检测、筛选转绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(DsRed)基因的植物、动物及微生物,如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细:菌、真菌等等,请咨询上海峰志仪器有限公司。

GFP荧光蛋白激发光源应用案例
荧光蛋白激发光源应用于植物和动物研究实验室,为广大动植物研究的科研工作者带来了诸多的便利,以下为荧光蛋白激发光源常见应用:
1、有时候,研究者们需要对小鼠的伏隔核进行穿孔,以便进一步生化分析。如果能观测到共转染的荧光,就能很容易找到正确的穿孔部位。研究者们就可以用LUYOR-3260RB单荧光蛋白观测手电筒来观测荧光,从而找到正确穿孔位置的。研究者从小鼠大脑中提取GFP标记的背纹体。他们把这比喻成:从一个大一点的燕麦片中分离出一块小的燕麦片,这是很困难的。但是他们用的单荧光蛋白观测手电筒LUYOR-3430RB,就很容易看到大脑中的目标区域,从而让解剖更准确。
2、用LUYOR-3430RB单荧光蛋白观测手电筒,可以很快的检测样本是否染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin标记)成功。
3、用于结核分枝杆菌重组株的筛选,在结核分枝杆菌中成功构建了高效同源重组系统,利用该系统构建了rv1364c、pstP跨膜区、pstP胞外区三个突变株,得到双交换突变株的效率为25% -62.5%,从双交换突变株得到无痕缺失突变株的效率为100%.通过gfp作为荧光标记基因,利用LUYOR-3430RB GFP激发光源和LUV-30A荧光观测眼镜,可以对平板上的基因缺失株直接进行快速判定。

荧光蛋白激发光源激发出绿色荧光时,用LUV-30A黄色滤光镜观测,可检测含绿色荧光蛋白(GFP)的生物;激发光源激发红色荧光时,用LUV-50A红色滤光镜观测,可检测含红色荧光蛋白(DsRed)的生物。更多荧光蛋白激发光源用于检测、筛选转绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(DsRed)基因的植物、动物及微生物,如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细:菌、真菌等等,请咨询上海峰志仪器有限公司。

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RFP荧光蛋白在老鼠上的表达

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GFP激发光源在细胞生物学的应用 

GFP激发光源在细胞生物学的应用具有易于检测、荧光稳定、广谱性、易于载体构建、无毒害诸多优点,因为在生物学应用广泛,上海峰志仪器有限公司销售的GFP激发光源为你简单整理10个应用:

1、对细胞生理过程监控
通过基因操作,蛋白与不同GFP进行融合,形成融合蛋白。通过融合蛋白在激发光源的照射下发出荧光特制,可以对相应蛋白的表达和转运以及生理反应进行监控。监控主要有:转移和定位、GFP光谱的生化修饰、荧光共振的能量转移。

2、细胞筛选
基于GFP能够吸收并在激发光源照射下发出荧光,并且荧光稳定以及检测方法快速、方便的特性,GFP在细胞筛选上广泛应用。如:应用流失细胞计数仪来筛选蛋白产量增强的细胞;使用GFP作为标记快速筛选出在生长抑制环境下仍能保持重组蛋白大量表达的CHO细胞;通过GFP荧光的减少,可以检测出鼠和人细胞的凋亡;利用GFP融合细胞作为细胞表面活体荧光标记,通过筛选已经获得GFP表达的E.coli、人体肾细胞和猿猴COS-1细胞灯特殊类型。

3、细胞亚结构及蛋白质分子的定位
相对于以前使用细胞分级分离和免疫细胞化学技术研究蛋白质移位,现在使用GFP融合蛋白显像技术更简便且可靠,既能更快又能更全面的对蛋白质的移动进行研究。如:对几个GFP突变体的检定,通过激发光源激发不同荧光,从而在活细胞中准备的区分多种不同荧光融合蛋白并了解他们的分布情况。

4、用于细胞内蛋白质的动力学研究
研究细胞内蛋白质相互作用的技术主要有:光漂白荧光恢复法(FRAP)、光漂白荧光损失法(FLIP)。FRAP主要是通过对细胞内特定的点或区域进行强烈的光照,使荧光发生光跑白作用,再通过相同时间间隔的光影像采样记录下荧光恢复的动力学过程。FLIP是对细胞的一个区域进行持续性的光漂白,再对光漂白区外的荧光的损失进行监控就可获得一些标记蛋白之间的相关性信息。另外一种可以用来研究细胞内返佣动力学的方法就是荧光相关性分光光镜检查。

5、计算细胞生长速度
在高水平组合型表达GFP的细胞品系中,在细胞生长的对数期。绿色荧光蛋白激发后所发出的荧光信号与细胞的数量密切相关。测量到的任何荧光强度都可以相应地转变为细胞浓度。尽管在细胞生长的后期,用荧光信号计算得到的细胞数目略低于培养物种的实际数目。但在常用的台盼蓝技术方法中,这些误差是允许的。利用这一技术,可以测定某些细胞的分布和生长状况,尤其是一些透明的动植物组织内特定细胞、化合物的生长、分布情况。也有人用此项技术进行病毒在植物体内的生长、扩散情况的研究,取得了不错的效果。

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6、观察细胞内酶的活动
GFP不仅可以用来探测融合蛋白的空间定位,而且可以对活细胞的酶活动,如:磷酸化作用、蛋白水解作用灯进行报告,还可测量与酶活动相关的细胞内的pH、cAMP、Ca2+浓度。通过将外源系列插曲GFP基因中,可以对细胞内酶的活动进行观察以及了解这些酶的生理学参数。插入外源基因后所表达的融合蛋白中的GFP蛋白发色基团会发生构像改变,其发射的荧光的强度发生很大的变化。这些指示剂可以用来检测细胞内许多酶的作用。例如:蛋白水解酶、激酶、氧化还原酶以及一些小配基的浓度。

7、用于细胞示踪实验研究
利用GFP的激发后发出荧光可以清楚地对肿瘤细胞的生长和转移进行追踪。体内肿瘤侵袭的研究要求在周围正常细胞背景下,能识别少量甚至是单个的瘤细胞。

8、基因表达调控
GFP作为一种活体报告蛋白,用于研究基因表达的调控,易于会提观测和检测。

9、定量分析
GFP的荧光强度很高,很容易用一起定量检测,而且研究表明GFP的荧光强度与其相连的细胞或蛋白有一定的相关性,只需要作出一条相关性曲线,就可以对研究队形进行定量的分析。

10、DFP报告蛋白用于细胞活体分离与纯化
利用细胞表面标记,通过流体细胞分光光度计或荧光活化细胞筛选仪可以分离与纯化特殊类型细胞,对分析cDNA文库、研究基因的细胞发育或组织专一性表达十分重要。利用GFP融合蛋白为细胞表面活体荧光标记,通过筛选已经获得GFP的表达的大肠杆菌、人体肾细胞和猿猴COS-1细胞特殊类型。

上海峰志仪器有限公司现货供应各种荧光蛋白激发光源(GFP、eGFP、BFP、CFP、YFP、RFP、Dsred、Mcherry),能够观测绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白等在种子、愈伤组织、叶片等上的表达,便携式GFP激发光源能够在实验室、温室大棚、试验田等地方直接观测荧光蛋白的表达,咨询电话:138-1868-3556,联系人:张小姐。

荧光蛋白GFP的应用

荧光蛋白GFP在激发光源的照射下,人眼能明显的看到荧光,而一起被广泛应用于各种生物研究,主要特性如下
1、易于检测
GFP荧光反应不需外加任何反应底物,酶或其他共反应银子,也就不存在这些物质可能难于进入细胞的问题,只需紫外线光或蓝光激发光源激发,即可发出绿色荧光,GFP发射的荧光用LUV-30A荧光观测眼镜或用荧光显微镜就可以检测到。灵敏度高,对于单细胞水平的表达也可识别,同时还可利用其进行定量检测。由于GFP对活细胞基本无毒害,因此无需特殊处理就可以很方便进行活体观察。而且,具有不同光谱特性的GFP突变体的获得,使在同一细胞中同时分析两种不同蛋白或启动子成为可能,可以用于法语细胞学、药物筛选、分析诊断灯研究。这就使GFP有可能成为一种快速、简便、经济的标记蛋白,GFP基因作为报道基因有很广泛的应用。
2、荧光稳定
GFP无光漂白现象,在很大PH范围内(PH7-12)都可以正常发出荧光,手温度的影响也很小,只有在超过65℃时才会变性,即荧光消失。荧光显微镜强光照射下,GFP抗光漂白能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下更稳定,单在340-390nm或395-440nm范围内,仍会发生光漂白现象。对于长时间光照,GFP也有很好的耐受性,根据Sheen等的研究,GFP在受体内表达时可以持续得到不低于10min的荧光。
3、广谱性
 首先表现在它的表达几乎不受种属范围的限制,在微生物、植物、动物中都获得了成功的表达;其次就是没有细胞种类和位置的限制,在各个部位都可以表达,在紫外线光或蓝光激发光源激发下发出肉眼可见的荧光。
4、易于载体构建
 由于GFP较小,只含有238个氨基酸,编码GFP的基因序列也比较短,约2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起构建多种质粒,而不至于使质粒过大影响转化频率。尽管野生型的GFP在某些植物和动物中表达很弱,但是可以通过更换GFP生色团氨基酸改变碱基组分、出去内含子、更换强启动子灯方法加强表达。Connack等筛选出三种含Ser65突变的突变体,在大肠杆菌中表达时,紫外线光或蓝光激发光源激发下的荧光强度比野生型高约100倍。
5、无毒害
Chalfie等的研究表明:GFP对生活细胞基本无毒害,Sheen等的研究进一步表明:在玉米中,即便GFP在细胞中的表达量很高时,对细胞也不会产生明显毒害,但是至今我们还不了解它对植物再生能力的影响。

荧光蛋白激发光源产品介绍:

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