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用什么光源激发gfp荧光蛋白?

作者:上海峰志仪器 时间:2021-07-27 15:22:08浏览182 次

信息摘要:

采用便携式GFP激发光源(又叫荧光蛋白观测镜)是zui便捷、zui方便的观察方法,因GFP在470nm有一个很高的吸收峰,采用  470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光,在观察gfp荧光时,因为激发光为强烈的蓝色光线,必须佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。推荐使用美国路阳LUYOR-3410或LUYOR-3415便携式激发光源。

用什么光源激发荧光蛋白?

LUYOR-3415RG荧光蛋白定位激发光源可与荧光蛋白观察镜luv-50A或 luv-60A一起使用直接观察绿色荧光蛋白(GFP)或黄色荧光蛋白(YFP)。激发光源与观察眼镜LUV-50A共同使用,可在动物设备的固定位置如消毒层流柜直接观察绿色荧光蛋白(GFP)。两个握杆之间的空间可容纳小动物的笼子(如小鼠)。LUYOR-3415RG激发光源使用锂电池组供电,可与观察镜luv-50A 或 luv-60A一起使用直接观察绿色荧光蛋白(GFP)或黄色荧光蛋白(YFP)。

绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)

 绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。GFP具有多种优点:易于检测,灵敏度高;荧光性质稳定,耐受性强;易于表达,无细胞毒性;可用于活细胞检测。因此,GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控,或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用,或者靶向标记某些细胞器。

GFP吸收的光谱zui大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副吸收峰(蓝光);发射光谱zui大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder)。虽然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于该激发光对细胞的伤害更小,因此通常多使用该波段光源(多为488nm)。此外,GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下更稳定。

类似的,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白,比如萤火虫荧光素酶等。

观察GFP荧光蛋白方法有:

1.便携式GFP激发光源:

采用便携式GFP激发光源(又叫荧光蛋白观测镜)是zui便捷、zui方便的观察方法,因GFP在470nm有一个很高的吸收峰,采用  470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光,在观察gfp荧光时,因为激发光为强烈的蓝色光线,必须佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。推荐使用美国路阳LUYOR-3415或LUYOR-3410便携式激发光源。

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上图为采用便携式GFP激发光源观察到的效果


2. 紫外光源

采用紫外光源(又叫紫外线灯黑光灯观察也非常方便,但如果观察植物,植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光,对gfp发出的荧光也会产生干扰,另外,标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。

LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源可野外、实验室原位测定GFP(绿色荧光蛋白)。通过定点观察GFP,可有利于学习如何操纵和提高有用的染色体特性,从而可以筛选出高基因表达的植物。

 LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源的应用:

1、 野外、实验室原位测定GFP(绿色荧光蛋白)。
2、 应用于转基因作物研究。
3、 区别可遗传性改良生物体和不可遗传的改良生物体。
4、 用于基因表达的研究。
5、 用于Rhodamine(红色荧光染料)、叶绿素、荧光素的研究。

以上部分内容来自http://www.luyor.net/app/app202.html 

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GFP观察常见问题:

1.动物植物里面表达GFP如何观察和拍照?

首先要选择光线比较暗的环境,佩戴路阳LUV-90P观察眼罩,采用美国路阳荧光蛋白观察镜LUYOR-3410RB照射要观察的植株,GFP表达位置即可清晰呈现。

2.观察到的GFP表达位置如何拍照?

要拍照植物GFP表达的位置,首先要有一台单反相机,安装美国路阳LUV-520植物拍照滤镜,美国路阳LUV-520滤镜是62mm,如果您的单反相机镜头不是62mm,可在市场上购买滤镜安装转换卡,也可直接找美国路阳中国服务中心免费索取,用LUYOR-3410RB荧光蛋白观察镜照射植物,用装有LUV-520滤镜的单反相机直接拍照就行了,切记要关闭照相机闪光功能。

3.红色荧光蛋白如何观察和拍照?

首先要选择光线比较暗的环境,佩戴路阳LUV-50观察眼罩,采用美国路阳便携式荧光蛋白观察镜LUYOR-3410GR照射要观察的植株,GFP表达位置即可清晰呈现。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

4. 用LUYOR-3410RB便携式荧光蛋白观察镜需要把植物叶片采下来观察吗?

LUYOR-3410RB便携式荧光蛋白观察镜内置有充电电池,即开即用,可以直接带入到试验田里面观察, 无需采摘叶片,如果试验田光线太亮,需要做隔光处理。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

5. LUV-520拍照滤镜可以用于其他厂家的激发光源吗?

凡是能激发GFP荧光的荧光蛋白观察镜, LUV-520拍照滤镜均能够满足,可以单独购买LUV-520拍照滤镜。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

6.  365nm、450nm、488nm 用哪个波段zui好?

GFP和egfp用这几个波段都能激发出荧光,365nm激发的比较弱,488nm激发的荧光zui强,但488nm的激发波长太接近发射波长520nm,激发光和发射光距离太近对观察眼镜要求太高,观察眼镜很难把发射光隔离掉,会严重干扰发射的荧光。所以用450nm的激发光是zui理想的。

7.  365nm的紫外光源照射植物叶片为什么是红色和黄色?

365nm的紫外光源照射植物叶片,叶片的叶绿素在紫外线作用下会发红光,GFP发出的是绿色的荧光,红色和绿色混在一起,会变成黄色,所有,用紫外光源照射叶片上黄色部位有可能就是GFP表达的位置。

8.  为什么观察眼镜和拍照滤镜价格这么贵?

因为这种眼镜和滤镜的镜片对波段的截止要求特别高,不允有任何激发光通过,镜片表面经过了60多层涂层处理,制造工艺特别复杂。

9.  观察眼镜和拍照滤镜如何保养?

观察眼镜和拍照滤镜的镜片经过了60多层涂层处理,不用时请放置好,表面有灰尘请用柔软的镜头布蘸中性洗涤剂擦洗.

10. LUYOR-3415rg荧光蛋白观察镜主要有哪些应用?

1.检测转绿色荧光蛋白(GFP)基因、红色荧光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥等;
2.检测转GFP、DsRed基因动物:小鼠、兔子、猴子等;
3.检测转GFP、DsRed基因微生物:细菌、真菌、酵母等;
4.检测GFP、DsRed基因组织特异性表达

11.在哪里可以买到美国路阳的便携式荧光蛋白观察镜?

美国路阳在上海设立有中国客户服务中心,提供路阳产品的销售维修服务。上海、北京、郑州均可免费上门演示,美国路阳对中国地区的客户提供3年免费维修服务,中国地区免费咨询电话:4006-254-365

如何选择荧光蛋白激发波长GFP,FITC,RFP ......)?

LUYOR提供五种不同的荧光蛋白激发波长光源,配有经济型体视显微镜荧光适配器和便携式双荧光蛋白激发光源。这些可用于激发多种荧光团。此页面提供有关为您的应用选择正确波长组的指导。
表 1列出了LUYOR波长组,包括激发范围的zui强烈部分和成对发射滤光片的截止值。
表2  列出了我们推荐用于各种荧光蛋白和染料的波长组。如果您没有在列表中看到您的荧光团,请告诉我们,我们将添加它。如果您发现任何错误或可以根据您的个人经验验证效果,请同时告诉我们。

我们的建议基于荧光团的工作知识 - 我们自己或客户的反馈 - 或已公布的光谱数据。

表一:荧光蛋白的波长组

指定激发发射适用于
UV -  紫外线360 - 380nm415nm长波通Dapi
VI -  紫罗兰400 - 415nm450nm长波通蓝色荧光蛋白
青色荧光蛋白
RB -  皇家蓝440-460nm500nm长波通绿色荧光蛋白
RB -  皇家蓝440-460nm500 - 560nm带通绿色荧光蛋白
CY -  青色490 - 515nm550nm长波通黄色荧光蛋白
GR -  绿色510 - 540nm600nm长波通红色荧光蛋白

荧光蛋白和荧光物质的激发波长的选择

Fluorescent Protein/DyeUV(紫外线) VI (紫色)RB(蓝色)CY(青色)GR(绿色)
Alexa Fluor 488



Alexa Fluor 555



Alexa Fluor 568



Alexa Fluor 594



amCyan1



Aquamarine



Calcein



Cerulean



CFP



Citrine



Clover



Cy3



CyOFP1



CyPet



DAPI



DASPEI



Dextran-FITC



Dextran-Texas Red



Dextran-TRITC



DiI



DsRed


2推荐
DsRed Dimer2



E2-Orange



EBFP



EBFP2



ECFP



EGFP



eqFP670



EYFP



FAM (fluorescein)



FITC



Fluorescein



FusionRed



X
Fluorescent Protein/DyeUVVIRBCYGR
GFP



Hoechst



iFP1.4推荐2


KO1



LSSmOrange



Lucifer Yellow



mAmetrine



mApple



mAzamiGreen



mBanana




我公司生产多款便携式荧光蛋白激发光源,如希望提供更多详细信息,可直接联系上海路阳生物技术有限公司的销售客服。.

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