用什么光源激发gfp荧光蛋白？

用什么光源激发荧光蛋白?

LUYOR-3415RG荧光蛋白定位激发光源可与荧光蛋白观察镜luv-50A或 luv-60A一起使用直接观察绿色荧光蛋白（GFP）或黄色荧光蛋白（YFP）。激发光源与观察眼镜LUV-50A共同使用，可在动物设备的固定位置如层流柜直接观察绿色荧光蛋白（GFP）。两个握杆之间的空间可容纳小动物的笼子（如小鼠）。LUYOR-3415RG激发光源使用锂电池组供电，可与观察镜luv-50A 或 luv-60A一起使用直接观察绿色荧光蛋白（GFP）或黄色荧光蛋白（YFP）。

绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)

 绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。GFP具有多种优点：易于检测，灵敏度高；荧光性质稳定，耐受性强；易于表达，无细胞毒性；可用于活细胞检测。因此，GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。

GFP吸收的光谱zui大峰值为395nm（紫外），并有一个峰值为470nm的副吸收峰（蓝光）；发射光谱zui大峰值为509nm（绿光），并带有峰值为540nm的侧峰（Shouder）。虽然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于该激发光对细胞的伤害更小，因此通常多使用该波段光源（多为488nm）。此外，GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐（FITC）很相似，两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下更稳定。

类似的，GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高，抗光漂白能力强，因此更适用于定量测定与分析。由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物，因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白，其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶，荧光信号没有酶学放大效果，因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白，比如萤火虫荧光素酶等。

观察GFP荧光蛋白方法有：

1.便携式GFP激发光源：

采用便携式GFP激发光源(又叫荧光蛋白观测镜）是zui便捷、zui方便的观察方法，因GFP在470nm有一个很高的吸收峰，采用  470nm激发光源能够激发GFP发出明亮的绿色荧光，在观察gfp荧光时，因为激发光为强烈的蓝色光线，必须佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。推荐使用美国路阳LUYOR-3415或LUYOR-3410便携式激发光源。

上图为采用便携式GFP激发光源观察到的效果

2. 紫外光源：

采用紫外光源（又叫紫外线灯、黑光灯）观察也非常方便，但如果观察植物，植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光，对gfp发出的荧光也会产生干扰，另外，标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。

LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源可野外、实验室原位测定GFP(绿色荧光蛋白)。通过定点观察GFP，可有利于学习如何操纵和提高有用的染色体特性，从而可以筛选出高基因表达的植物。

 LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源的应用：

1、 野外、实验室原位测定GFP(绿色荧光蛋白)。
2、 应用于转基因作物研究。
3、 区别可遗传性改良生物体和不可遗传的改良生物体。
4、 用于基因表达的研究。
5、 用于Rhodamine（红色荧光染料）、叶绿素、荧光素的研究。

以上部分内容来自http://www.luyor.net/app/app202.html 

GFP观察常见问题：

1.动物植物里面表达GFP如何观察和拍照？

首先要选择光线比较暗的环境，佩戴路阳LUV-90P观察眼罩，采用美国路阳荧光蛋白观察镜LUYOR-3410RB照射要观察的植株，GFP表达位置即可清晰呈现。

2.观察到的GFP表达位置如何拍照？

要拍照植物GFP表达的位置，首先要有一台单反相机，安装美国路阳LUV-520植物拍照滤镜，美国路阳LUV-520滤镜是62mm，如果您的单反相机镜头不是62mm，可在市场上购买滤镜安装转换卡，也可直接找美国路阳中国服务中心免费索取，用LUYOR-3410RB荧光蛋白观察镜照射植物，用装有LUV-520滤镜的单反相机直接拍照就行了，切记要关闭照相机闪光功能。

3.红色荧光蛋白如何观察和拍照？

首先要选择光线比较暗的环境，佩戴路阳LUV-50观察眼罩，采用美国路阳便携式荧光蛋白观察镜LUYOR-3410GR照射要观察的植株，GFP表达位置即可清晰呈现。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位？

4. 用LUYOR-3410RB便携式荧光蛋白观察镜需要把植物叶片采下来观察吗？

LUYOR-3410RB便携式荧光蛋白观察镜内置有充电电池，即开即用，可以直接带入到试验田里面观察， 无需采摘叶片，如果试验田光线太亮，需要做隔光处理。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位？

5. LUV-520拍照滤镜可以用于其他厂家的激发光源吗？

凡是能激发GFP荧光的荧光蛋白观察镜， LUV-520拍照滤镜均能够满足，可以单独购买LUV-520拍照滤镜。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位？

6.  365nm、450nm、488nm 用哪个波段zui好？

GFP和egfp用这几个波段都能激发出荧光，365nm激发的比较弱，488nm激发的荧光zui强，但488nm的激发波长太接近发射波长520nm，激发光和发射光距离太近对观察眼镜要求太高，观察眼镜很难把发射光隔离掉，会严重干扰发射的荧光。所以用450nm的激发光是zui理想的。

7.  365nm的紫外光源照射植物叶片为什么是红色和黄色？

365nm的紫外光源照射植物叶片，叶片的叶绿素在紫外线作用下会发红光，GFP发出的是绿色的荧光，红色和绿色混在一起，会变成黄色，，用紫外光源照射叶片上黄色部位有可能就是GFP表达的位置。

8.  为什么观察眼镜和拍照滤镜价格这么贵？

因为这种眼镜和滤镜的镜片对波段的截止要求特别高，不允有任何激发光通过，镜片表面经过了60多层涂层处理，制造工艺特别复杂。

9.  观察眼镜和拍照滤镜如何保养？

观察眼镜和拍照滤镜的镜片经过了60多层涂层处理，不用时请放置好，表面有灰尘请用柔软的镜头布蘸中性洗涤剂擦洗.

10. LUYOR-3415rg荧光蛋白观察镜主要有哪些应用？

1.检测转绿色荧光蛋白（GFP）基因、红色荧光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥等；
2.检测转GFP、DsRed基因动物：小鼠、兔子、猴子等；
3.检测转GFP、DsRed基因微生物：细菌、真菌、酵母等；
4.检测GFP、DsRed基因组织特异性表达

11.在哪里可以买到美国路阳的便携式荧光蛋白观察镜？

美国路阳在上海设立有中国客户服务中心，提供路阳产品的销售维修服务。上海、北京、郑州均可免费上门演示，美国路阳对中国地区的客户提供3年免费维修服务，中国地区免费咨询电话：4006-254-365

如何选择荧光蛋白激发波长（GFP，FITC，RFP ......）？

LUYOR提供五种不同的荧光蛋白激发波长光源，配有经济型体视显微镜荧光适配器和便携式双荧光蛋白激发光源。这些可用于激发多种荧光团。此页面提供有关为您的应用选择正确波长组的指导。
表 1列出了LUYOR波长组，包括激发范围的zui强烈部分和成对发射滤光片的截止值。
表2  列出了我们推荐用于各种荧光蛋白和染料的波长组。如果您没有在列表中看到您的荧光团，请告诉我们，我们将添加它。如果您发现任何错误或可以根据您的个人经验验证效果，请同时告诉我们。

我们的建议基于荧光团的工作知识 - 我们自己或客户的反馈 - 或已公布的光谱数据。

表一：荧光蛋白的波长组

荧光蛋白和荧光物质的激发波长的选择

我公司生产多款便携式荧光蛋白激发光源，如希望提供更多详细信息，可直接联系上海路阳生物技术有限公司的销售客服。.

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